藥明奧測LAG-3試劑盒開放與藥企合作伙伴進行CDx三類伴隨診斷共同開發(fā)

在PD-1/PD-L1靶點大火之后，面對擁擠的PD-1賽道，與PD-1同屬免疫檢查點的其它靶點，如LAG-3、TIGIT等也逐步走入了相關(guān)藥企和診斷企業(yè)的視線。今年3月，Relatlimab獲FDA批準，與抗PD-1藥物Nivolumab聯(lián)合，用于治療12歲以上不可切除或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的成人與兒童患者。隨著首款獲批LAG-3抗體的誕生，該靶點也受到了更為廣泛的關(guān)注。

在LAG-3檢測方法和伴隨診斷的開發(fā)中，一些重要的問題值得進行深入的討論，比如LAG-3究竟如何抑制T細胞？LAG-3藥物往往與PD-L1/PD-1藥物聯(lián)用或者開發(fā)雙抗，那么兩個靶點的分層分析以及伴隨診斷開發(fā)有什么特點？本文將在介紹LAG-3靶點的基礎(chǔ)上進一步就這些問題做一些探討。

01 LAG-3簡介和機制探討

LAG-3（淋巴細胞激活基因3）是一種細胞表面分子，對T細胞功能具有多種生物學(xué)效應(yīng)，是藥企尋求開發(fā)腫瘤和自身免疫性疾病新療法的重要靶標。LAG-3 （CD223）蛋白屬于免疫球蛋白(Ig)超家族，是一種I型跨膜蛋白，具有四個細胞外Ig樣結(jié)構(gòu)域，稱為D1至D4。LAG-3的胞外區(qū)與CD4具有約20%的氨基酸同源性。

LAG-3在活化的T細胞、NK細胞、B細胞和漿細胞樣樹突狀細胞等上表達。此外，據(jù)報道，LAG-3在神經(jīng)元上也表達。

截至目前，主流觀點認為LAG-3的主要配體是MHC II，LAG-3與MHC II結(jié)合的親和力高于CD4。其它配體包括：FGL1及LSECtin等。LAG-3以與CTLA-4和PD-1類似的方式負調(diào)節(jié)T細胞的細胞增殖、活化和穩(wěn)態(tài)。

LAG-3究竟如何抑制T細胞？研究人員們對LAG-3機制的探索從未停止。有研究者推測，LAG-3與MHC-II相互作用以阻止同一MHC分子與TCR和CD4結(jié)合，從而直接阻礙免疫反應(yīng)中的TCR信號傳導(dǎo)。同時，該研究團隊也表示，LAG-3的確切信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制仍待進一步研究。此外，有研究者認為LAG-3可能并非通過CD4競爭性抑制的機制來抑制T細胞的活化，LAG-3選擇性結(jié)合穩(wěn)定的pMHCII并抑制識別穩(wěn)定pMHCII的CD4+ T細胞的活化。

今年4月，一篇發(fā)表于Nature Immunology的文章提示，在沒有MHC II結(jié)合的情況下，LAG-3與TCR–CD3復(fù)合物相關(guān)，通過驅(qū)動共受體Lck解離來抑制信號傳導(dǎo)，從而抑制T細胞的活性。

圖1：LAG-3與MHC II的相互作用

圖2：LAG-3選擇性結(jié)合穩(wěn)定的pMHCII并抑制T細胞活化

02 國內(nèi)外藥企布局靶向LAG-3的藥物

LAG-3已然成為了廣受藥企關(guān)注的免疫靶點，那么，各大藥企究竟在LAG-3靶點上發(fā)力幾何呢？在此，我們在下表中列出了LAG-3靶向療法的最新進展情況。

表1：LAG-3靶向藥物開發(fā)的最新進展

從上表可以看出，目前主要有LAG-3單抗、LAG-3雙特異性抗體、LAG-3融合蛋白這三類LAG-3相關(guān)藥物正在臨床開發(fā)中，具體每類藥物的臨床試驗藥物進展分析如下：

1 LAG-3單抗

LAG-3單抗主要通過靶向LAG-3，激活T細胞，從而激發(fā)人體的免疫系統(tǒng)。然而LAG-3單抗的研發(fā)之路充滿了坎坷?；趯εR床數(shù)據(jù)的評估，2021年，Immutep宣布授權(quán)合作伙伴GSK停止在活動性潰瘍性結(jié)腸炎患者中評價LAG-3單抗藥物GSK2831781（IMP731）的II期臨床試驗。由于LAG-3單抗單獨用藥在臨床拓展中仍存在一些挑戰(zhàn)，故而目前聯(lián)用其它免疫檢查點藥物如PD-1藥物是腫瘤免疫療法提高臨床療效的常見策略。

因此，已有PD-1藥物獲批的藥企，無疑在LAG-3靶點的單抗開發(fā)上占得先機。BMS最先著手研究LAG-3靶點，該公司開發(fā)的瑞拉利單抗(Relatlimab)與O藥的聯(lián)合用藥，已在臨床研究中證明了依從性和藥物不良反應(yīng)弱于該藥企此前的Y藥+O藥的療法，療效上亦優(yōu)于O藥單用。

今年年初，Relatlimab與Nivolumab聯(lián)合療法用于未經(jīng)治療的晚期黑色素瘤的研究結(jié)果發(fā)布于新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志。共有714名來自全球111個研究中心的晚期黑色素瘤患者參與了這項II/III期、雙盲、隨機臨床試驗，結(jié)果顯示，Relatlimab–Nivolumab聯(lián)合治療組的中位無進展生存期為10.1個月，而Nivolumab單藥治療組為4.6個月。在第12個月的隨訪時，Relatlimab–Nivolumab聯(lián)合治療組的無進展生存率為47.7%，Nivolumab組為36.0%。

臨床試驗結(jié)果提示，在既往未經(jīng)治療的轉(zhuǎn)移性或不可切除的黑色素瘤患者中，與抗PD-1單藥治療相比，抗LAG-3和抗PD-1聯(lián)合治療顯示出更多的臨床獲益；同時，臨床結(jié)果也顯示，LAG-3高表達的患者對該藥的反應(yīng)更佳。

圖3：Relatlimab–Nivolumab聯(lián)合治療組與Nivolumab組的無進展生存期

默沙東作為K藥的生產(chǎn)商，LAG-3單抗favezelimab與K藥聯(lián)合的療法在MSS CRC治療中的1期臨床結(jié)果評分優(yōu)于標準療法，目前已開始3期臨床，有望成為下一個獲批上市的LAG-3靶點藥物。

此外，勃林格殷格翰公司的BI-754111聯(lián)合自家PD-1單抗和VEGF/Ang2雙抗的2期臨床試驗也已經(jīng)啟動。再生元公司開發(fā)了一款新穎的Zr-89標記抗LAG-3的單克隆抗體REGN3767，可用于癌癥PET，也與自家的PD-1單抗組合進行了1期臨床試驗，試驗結(jié)果較好，已啟動了1/2期臨床。

諾華、GSK、Incyte等國際藥企也紛紛布局LAG-3靶點，均有單抗在研，目前大部分均與PD-1單抗聯(lián)合用藥，也有少數(shù)與TIM3等靶點聯(lián)合用藥，臨床試驗進展良好。

國內(nèi)藥企亦不乏LAG-3單抗管線，恒瑞和信達均有一款LAG-3單抗在研，與自家研發(fā)的PD-1單抗聯(lián)合用藥的1/2期臨床進行中，目前安全性和耐受性良好。

百濟神州則與維立志博合作開發(fā)LBL-007，聯(lián)合了君實生物已上市的PD-1單抗進行聯(lián)合用藥，1/2期臨床試驗進行中。

2 LAG-3雙抗

在今年的LAG-3靶向藥物研發(fā)峰會（LAG3 Targeted Drug Development Summit）上，多個團隊的研究者表示相比單抗或聯(lián)合治療，PD-1/LAG-3雙特異性抗體或許更具優(yōu)勢。

一些藥企選擇了直接開發(fā)共靶點的雙抗，代表公司是MacroGenics，該公司與再鼎醫(yī)藥合作研發(fā)的Tebotelimab是一款針對LAG-3/PD-1的雙抗。這是一款雙特異性四價的抗體，在抗體Fc區(qū)域增加了兩個靶向LAG-3的蛋白域，能夠同時驅(qū)動PD-1和LAG-3靶點下調(diào)，提供更持久的療效。前期有研究結(jié)果表明，LAG-3高表達的患者對Tebotelimab的反應(yīng)良好。目前，該藥與MacroGenics公司的B7-H3單抗Enoblituzumab聯(lián)用的2期臨床研究正在國外開展。

岸邁生物基于專有的Fabs-In-Tandem免疫球蛋白技術(shù)，開發(fā)了一款同時靶向PD-1和LAG-3的雙克隆抗體，目前體外研究認為有明確的抗腫瘤活性，1/2期臨床研究已經(jīng)完成首次給藥。

羅氏，F(xiàn)-star Therapeutics等國際藥企也擁有LAG-3和PD-1/PD-L1共靶點的雙抗的管線，羅氏選擇了與PD-1/TIM3雙抗RO-7121661聯(lián)用，F(xiàn)-star Therapeutics則選擇了單獨用藥，現(xiàn)在已經(jīng)進行到了2期臨床。Xencor公司不走尋常路，開發(fā)了一款LAG-3和CTLA4共靶點的雙抗，目前與K藥聯(lián)用的1期臨床進行中。

3 LAG-3融合蛋白

除此之外，Immutep公司把目光投向了新穎的融合蛋白領(lǐng)域，開發(fā)了一款可溶性LAG-3融合蛋白IMP-321，IMP321屬于可溶性重組LAG-3，可激活樹突狀細胞，誘導(dǎo)T細胞增殖。體外研究證明可用以誘導(dǎo)癌癥患者對腫瘤持續(xù)發(fā)生免疫反應(yīng)。該藥與K藥和紫杉醇的聯(lián)用在2期臨床試驗中獲得了積極的中期數(shù)據(jù)。

TACTI-003研究，即一項研究可溶性LAG-3融合蛋白Eftilagimod Alpha（IMP321）與Pembrolizumab聯(lián)合治療不可切除的復(fù)發(fā)性或轉(zhuǎn)移性頭頸部鱗狀細胞癌的多中心、開放標簽、隨機、II期臨床試驗正在招募中（NCT04811027）。

圖4：IMP321作用機制（Immutep公開資料）

根據(jù)目前全球進入臨床階段的LAG-3療法公開信息分析（具體如下圖所示）：整體看來，目前LAG-3靶點臨床研究很多，其中8款處于1期臨床試驗階段，13款進入2期（包括1/2期）臨床試驗，1款進入3期臨床試驗，1款已上市；LAG-3的藥物類型目前以單抗類藥物為主；與PD-1/PD-L1靶點的聯(lián)用或共用最為常見，也有少數(shù)臨床研究是與其它靶點比如TIM-3，CTLA-4聯(lián)合。

圖5：全球進入臨床階段的LAG-3療法公開信息分析

隨著第一款藥物的上市，LAG-3靶點已成功證明了自身價值，作為新興的藍海市場，未來發(fā)展可期。在PD-1/PD-L1市場已接近飽和的局面下，無論國外老牌藥企還是國內(nèi)創(chuàng)新藥企，都需要在新的免疫檢查點上尋求突破。LAG-3目前進入臨床階段的15款單抗、7款雙抗和1款融合蛋白，正在期待臨床數(shù)據(jù)的驗證。無論最終哪家藥企能在LAG-3靶點上獲得突破，都是腫瘤患者的福音。

03 LAG-3用于分層分析以雙靶點 伴隨診斷開發(fā)策略

在LAG-3相關(guān)療法中，LAG-3表達檢測對療效評估具有非常重要的意義。在Relatlimab與Nivolumab聯(lián)合治療晚期黑色素瘤一文中，如下圖所示，在兩個治療組中，LAG-3表達≥1%的患者組中位無進展生存期估計值更長。結(jié)果提示，LAG-3檢測將有助于實現(xiàn)更好的患者分層，實現(xiàn)精準醫(yī)療。

圖6：LAG-3表達分組的無進展生存期

實際上，這個臨床試驗里面對PD-L1和LAG3這兩個靶點都進行分層分析，如果把數(shù)據(jù)綜合來看，一方面觀察不同亞組的差異，另一方面觀察亞組內(nèi)部雙藥與單藥的差異，我們可以看到雙靶點療法的一些特點。

下圖的表格匯總了不同的分層亞組PFS中位數(shù)的差異，我們可以看到不管是LAG-3陽性還是PD-L1陽性，相比陰性患者，不論雙藥還是單藥PFS都顯著延長；另一個角度，如果比較聯(lián)用和單藥的效果差異，我們可以觀察到PD-L1陽性的亞組里面，雙藥和單藥的差異其實相對不明顯。

圖7：LAG-3/PD-L1表達，采用單藥/聯(lián)合用藥的患者PFS比較

施貴寶Relatlimab藥物的研究實現(xiàn)了所有用藥人群達到了臨床終點，因此目前并沒有LAG-3伴隨診斷試劑盒的申報。但隨著類似臨床研究的涌現(xiàn)，我們會越來越多的遇到雙靶點甚至多靶點用于患者篩選或者患者分層分析的情況，那么相應(yīng)的伴隨診斷開發(fā)也就會成為一個很關(guān)鍵的問題。

是否兩個靶點都需要考慮申報伴隨診斷？兩個靶點申報伴隨診斷時是否需要闡明相關(guān)關(guān)系？目前由于還沒有實際申報的案例，我們可以從邏輯上做一些探討，在總體上進行把握。有兩個靶點的時候，我們可以用這個模型來考慮伴隨診斷策略：

圖8 ：雙靶點伴隨診斷策略框架

當然，這里沒有探討可以輔助用藥決策的補充診斷，以及一個藥物和相關(guān)伴隨診斷已經(jīng)上市 vs 兩個靶點都沒有上市等情況。在具體項目中甚至有可能涉及兩家診斷企業(yè)甚至兩個藥企，實際上會遇到更復(fù)雜的情形。但萬變不離其宗，最終監(jiān)管需要的還是高質(zhì)量的伴隨診斷試劑盒以及它與藥效的關(guān)聯(lián)，抓住了這兩個線索，那么就可以用清晰的邏輯和證據(jù)來向監(jiān)管機構(gòu)闡明雙靶點伴隨診斷的申報策略。

04 LAG-3檢測方法和抗體選擇

根據(jù)文獻報道，LAG-3選擇性表達在活化的T淋巴細胞、自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）和樹突狀細胞。與Elisa、WB等蛋白檢測方法相比，免疫組化更能對于LAG-3的蛋白表達進行定性和定位，因此目前免疫組化在LAG-3的檢測中較為常見。

而在免疫組化中，為了得到特異性染色，獲得可靠結(jié)論，抗體的選擇是至關(guān)重要的一環(huán)。據(jù)不完全統(tǒng)計，目前全球共有1053種LAG-3抗體，用于IHC（免疫組化）、Elisa、WB、FC等蛋白檢測方法。

在IHC應(yīng)用中，17B4為最常用的抗體克隆號，17B4識別人 LAG-3 的第一個 N 端 D1 結(jié)構(gòu)域的 30 個氨基酸外環(huán)，此環(huán)參與了LAG-3和配體MHCII之間的結(jié)合，這也是LAG-3區(qū)別于CD4的主要結(jié)構(gòu)[2]。自20世紀90年代起，該克隆被廣泛應(yīng)用于LAG-3表達的檢測。此外，D2G4O、EPR20261等克隆也均有不錯的表現(xiàn)。藥明奧測LAG-3靶點覆蓋主流克隆，可為藥企提供個性化定制。

05 藥明奧測LAG-3抗體RUO試劑盒

目前藥明奧測已成功開發(fā)LAG-3抗體RUO試劑盒，特異性識別LAG-3靶點，定位準確，靈敏度高。該試劑盒在開發(fā)過程中，在宮頸癌、肝細胞癌、結(jié)腸腺癌、尿路上皮癌、黑色素瘤等癌種上均進行了抗體特異性檢測（圖12），并由病理醫(yī)生閱片，證明該試劑盒在不同癌種上的染色結(jié)果均能符合其特性。除手工版外，還配備機載版試劑盒，用于免疫組化染色機的批量樣本檢測。

藥明奧測LAG-3試劑盒開放與藥企合作伙伴進行CDx三類伴隨診斷共同開發(fā)，歡迎各藥企合作伙伴垂詢。

圖9：LAG-3抗體試劑盒染色結(jié)果40x（藥明奧測內(nèi)部數(shù)據(jù)）

轉(zhuǎn)自：搜狐網(wǎng)

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