復方丹參滴丸對高脂血癥大鼠血小板功能的影響

目的分析高脂血癥大鼠血小板功能的變化，探討復方丹參滴丸對高脂大鼠血小板功能的影響。

方法44只Wistar大鼠隨機分為正常對照組、高脂模型組、復方丹參滴丸組[160mg/kg·d]、阿托伐他汀組[10mg/kg·d]，分組干預4周后檢測血脂水平:總膽固醇CHO、甘油三酯TG、低密度脂蛋白膽固醇LDL-C、高密度脂蛋白膽固醇HDL-C的水平。應用酶聯(lián)免疫法測定血小板表面α-顆粒膜糖蛋白CD62P的濃度，流式細胞術(shù)FCM檢測血漿α顆粒膜蛋白-140GMP140濃度。

結(jié)果高脂血癥組CHO、LDL-C顯著升高;CD62P及GMP140水平明顯升高；復方丹參滴丸組和阿托伐他汀組GMP140及CD62P水平顯著降低。

結(jié)論高脂血癥能夠促使血小板活化，復方丹參滴丸具有與阿托伐他汀效果相似的抑制血小板活化的作用。

高脂血癥是心腦血管疾病的重要危險因素，血小板活化在血液黏度增高、血栓形成，以及動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。血小板表面α-顆粒膜糖蛋白CD62P及血漿α顆粒膜蛋白-140GMP140水平反應血小板活化功能，是血小板活化的標志物，能特異地與活化血小板結(jié)合。我們通過對高脂血癥大鼠血小板功能的變化及復方丹參滴丸的干預研究，來評價復方丹參滴丸對于高脂血癥大鼠血小板功能的影響，以期對臨床有所幫助。

A材料與方法

動物及分組

Wistar大鼠44只，體重269～298g，購自中國醫(yī)學科學院遺傳研究所實驗動物中心，合格證號:SCXK京2005-0013。適應性飼養(yǎng)1周后隨機分組，正常對照組常規(guī)飼料喂養(yǎng)10只，高脂飼料組34只。高脂飼料配方:2%膽固醇、0.35%膽酸鈉、0.3%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、82.35%基礎(chǔ)飼料。4周后高脂模型制造成功，隨機分成3組:高脂對照組14只、復方丹參滴丸組10只、阿托伐他汀組10只，分別給予高脂飼料、復方丹參滴丸天士立公司原料藥凈膏160mg/kg·d、阿托伐他汀北京嘉林藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)10mg/kg·d。除正常對照組外繼續(xù)高脂喂養(yǎng)，復方丹參滴丸、阿托伐他汀溶于2mL蒸餾水中每天罐胃1次，其余組每天給予蒸餾水2mL罐胃，干預4周。高脂飼料組、阿托伐他汀組、復方丹參滴丸組各死亡1只，完成試驗動物41只。

標本采集

在分組喂養(yǎng)前及高脂干預4周后，經(jīng)內(nèi)眥靜脈取血進行血脂分析。藥物干預4周后，各組經(jīng)腹主動脈使用一次性采血針及負壓真空采血管進行標本采集。前2mL進行血脂分析，中間1.5mL用1%多聚甲醛PFA1.5mL和3.8%枸櫞酸鈉0.3mL的負壓抗凝管采血進行CD62P流式細胞儀FCM檢測，最后2.0mL用EDTA抗凝管采血，分離血漿測定GMP140水平。

血脂的測量

血脂分析指標包括:膽固醇CHO、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C4項指標。上述指標在我院檢驗科生化室由專業(yè)檢驗師檢測。全自動生化儀，型號:RX-2000，美國TECHNICON公司生產(chǎn)。

CD62P的流式細胞術(shù)分析

熒光標記抗體購自SANTACRUZBIOTECHNOLOGYINC公司，CD61PE批號:sc-7311和CD62PFITC批號:sc-8419。采血后全血靜置固定20min后，取5μL標本加入CD61PE、CD62PFITC熒光標記單抗各5μL，室溫孵育20min后，加PBS至1mL重懸，應用COULTER公司的BECKMANCOULTERDU800型FCM進行分析。用SSC-FSC散點圖中找出血小板群R1、CD61PE/CD62PFITC散點圖中畫出血小板門及活化血小板。每份標本測定10000個血小板。對照管分別加入5μL羊抗兔IgGPE、羊抗兔IgGFITC作為對照。

GMP140測定

采血后分離血漿于-80℃冰箱凍存?zhèn)溆茫瑧锰柟綠MP140酶聯(lián)免疫試劑盒，嚴格按照說明書進行測量。

B統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差±s表示，應用SPSS11.5軟件處理，兩組之間均數(shù)比較應用t檢驗，多組間兩兩比較應用方差分析。

結(jié)果

基礎(chǔ)體重及血脂水平分析

高脂干預之前，測定10只常規(guī)飼料組與隨機抽取10只高脂飼料組大鼠的體重、血脂分析各指標無明顯差別，即兩組之間的基礎(chǔ)資料具有可比性（見表1）。

高脂喂養(yǎng)4周后血脂水平分析

高脂喂養(yǎng)4周后，常規(guī)飼料組大鼠10只和隨機抽取高脂飼料組大鼠16只進行血脂檢測，CHO、TG、LDL-C水平明顯升高、HDL-C/CHO明顯降低，提示大鼠高脂模型制造成功（見表2）。

復方丹參滴丸干預組血脂水平、血漿GMP140及血小板表面CD62P水平分析

繼續(xù)分組干預4周后檢測血脂水平、GMP140、CD62P等指標。正常對照組、高脂對照組、復方丹參滴丸組、阿托伐他汀組TG及HDL-C水平未見明顯差別P>0.05。高脂對照組CHO、LDL-C最高，HDL-C/CHO最低，GMP140、CD62P水平最高。說明高脂血癥組血小板活化程度最高。阿托伐他汀組血脂指標明顯改善的同時，GMP140、CD62P水平也明顯降低。復方丹參滴丸組CHO、LDL-C、HDL-C/CHO與高脂血癥組相比有改善的趨勢，但尚未達到統(tǒng)計學顯著性，但是GMP140、CD62P水平也明顯下降（見表3）。

由表3進一步分析可見，與高脂血癥組比較，復方丹參滴丸組與阿托伐他汀組GMP140、CD62P水平均明顯降低，且兩組之間無顯著差別，而且復方丹參滴丸及阿托伐他汀組，CD62P水平達到正常對照組水平，說明復方丹參滴丸與阿托伐他汀組干預效果相似GMP140:P=0.501，CD62P:P=0.705。

C討論

血脂異常、血小板活性增加和血管阻塞性并發(fā)癥的危險性密切相關(guān)，在降脂的同時降低血小板活性在血栓性疾病的臨床治療和預防心臟事件的發(fā)生方面有著十分重要的意義。GMP140以血小板膜CD62P和血漿GMP140兩種形式存在，是反映血小板活化最具有特異性的標志物。在血栓形成過程中，GMP140起始動作用，使血小板與中性粒細胞黏附、聚集，形成血栓。FCM檢測CD62P表達是評價血小板活化功能較為準確的方法。本研究顯示，高脂血癥大鼠血漿GMP140水平和血小板CD62P表達明顯增加，也說明高脂血癥促進血小板的活化。

復方丹參滴丸雖然沒有明顯的降低血脂水平的作用，但能夠顯著降低高脂血癥大鼠CD62P及GMP140的水平，而且降低的程度與阿托伐他汀相似，說明復方丹參滴丸抑制血小板活化的作用與血脂水平無關(guān)。不穩(wěn)定心絞痛UA患者存在血小板活化及纖溶活性異常，表現(xiàn)為GMP140含量升高、組織型纖維蛋白溶酶原活化劑t-PA活性減低和PAI-1活性增高。復方丹參滴丸能使UA患者血漿GMP140含量明顯降低，t-PA活性明顯升高，說明復方丹參滴丸能有效抑制血小板活化反應，改善纖溶活性。有研究表明復方丹參滴丸對血小板聚集率抑制作用基本上等同于、甚至優(yōu)于阿司匹林，而臨床不良反應較阿司匹林少。

本研究顯示:阿托伐他汀在顯著降低CHO、LDL-C、提高HDL-C/CHO比值的同時，明顯降低GMP140激CD62P水平，說明阿托伐他汀在有效調(diào)節(jié)脂代謝作用同時顯著抑制血小板活性，與Spencer研究結(jié)果相同。

來源：醫(yī)藥經(jīng)濟報

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